1 2 3 4 5
ВВЕДЕНИЕ
Хронический гломерулонефрит (ХГН) - это хроническое иммуновоспалительное заболевание почек с первоначальным и преимущественным поражением клубочков и прогрессирующим течением, исходом которого являются нефросклероз и почечная недостаточность [I].
Одной из важнейших функций организма является его способность замещать поврежденные или погибшие клетки. Регенерация почки обычно происходит за счет деления специализированных клеток органа [2] и завершается восстановлением нормальной структуры ткани (регенерация по типу
реституции). Однако в ряде случаев, тканевого регенераторного резерва не хватает и в органе появляются миофибробласты, экспрессирующие альфа-гладкомышечный актин (а-ГМА) и синтезирующие макромолекулы соединительной ткани [З], что может привести к формированию склероза почечной ткани (регенерация по типу субституции). В настоящее время показано, что при остром повреждении в регенерации почки у лабораторных животных принимают участие не только специализированные клетки, но и стволовые клетки, циркулирующие в периферической крови и имеющие фенотип CD34+, CD38-, Lin- [4-7].Основной целью данного исследования было установить, участвуют ли кроветворные стволовые клетки в регенерации почки при ХГН, и существует ли зависимость между активацией стволового компонента и степенью морфологической активности ХГН. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ Исследования проведены на материале 64 нефробиопсий больных ХГН, выполненных в нефрологическом и паталогоанатомических отделениях РКБ МЗ РТ. Материал фиксировали в 10% нейтральном формалине, заливали в парафин, готовили серийные срезы толщиной 5-6 мкм. Патоморфологическую оценку активности ХГН и выраженности склероза осуществляли полуколичественным методом [8]. При оценке индекса активности ХГН учитывали следующие признаки: интракапиллярная инфильтрация, полулуния, мезангиальная пролиферация, пролиферация подоцитов, нейтрофильная инфильтрация, депозиты, наличие тромбоцитов, кариорексис. При оценке индекса склероза учитывали наличае сморщенных клубочков, сегментарный склероз, синехии, перигломерулярный склероз и гиалиноз. Каждый признак оценивали в баллах (О - отсутствие изменений, 1 - минимальные изменения, 2 - умеренные изменения, 3 - максимальные). Иммуногистохимическое исследование нефробиоптатов проводили с использованием моноклональных антител против альфа-гладкомышечного актина (маркер миофибробластов), CD31 (маркер эндотелиальных клеток) и CD34 (маркер эндотелиальных и стволовых клеток) стрептовидинбиотиновым методом с использованием LSAB-kit компании DAKO [9]. Полуколичественную оценку выраженности экспрессии CD31, CD34, а-ГМК-актин проводили на серийных срезах три независимых морфолога по схеме: высокая активность - около 70% клеток экспрессируют искомый антиген, средняя активность - около 50%, ниже средней - 35%, низкая - менее 15% клеток экспрессируют искомый антиген. Возможное участие в регенераторном ответе кроветворных стволовых клеток определяли по разнице экспрессии CD31 и CD34. Статистическ далее