1
Средний отит - наиболее распространенное показание к антибиотикотерапии и хирургическим вмешательствам в детском возрасте. Экссудативный средний отит (ЭСО), который характеризуется наличием экссудата в среднем ухе при минимальных общих клинических проявлениях, может приводить к существенному снижению остроты слуха, что в дальнейшем вызывает речевые трудности и нарушение социальной адаптации пациентов. Среди причин ЭСО указывают инфекционные, аллергические и анатомические. При помощи культуральных методов в экссудате наиболее часто обнаруживают следующие патогены: Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae, Moraxella catarrhalis. Однако в 40 - 60% ЭСО посевы оказываются стерильными. Были проведены исследования с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР), результаты которых свидетельствуют о том, что бактериальная ДНК довольно часто обнаруживается в. экссудате при стерильных посевах. Однако оставалось неясным, что представляет собой эта ДНК - "обломки" погибших микроорганизмов или жизнеспособную популяцию бактерий. Методы В данной работе проводилось исследование образцов при помощи культурального метода и ПЦР на наличие Haemophilus influenzae. Образцы, в которых посредством ПЦР обнаруживалась бактериальная ДНК, подвергались дальнейшему изучению. Авторы исходили из того, что обнаружение в экссудате бактериальной транспортной РНК (тРНК) будет свидетельствовать о наличии в нем жизнеспособных, метаболически активных микроорганизмов, так как полупериод жизни тРНК составляет от нескольких секунд до нескольких минут. тРНК выявляли при помощи ПЦР с обратной транскриптазой (ПЦР-ОТ). Поскольку метод ПЦР позволяет выявлять только ДНК различных возбудителей, для обнаружения РНК необходим этап обратной транскрипции, на котором происходит перевод РНК в ДНК, что делает возможным ее последующее выявление. Перед проведением ПЦР-ОТ образцы подвергали обработке ДНКазой, разрушавшей бактериальную ДНК, наличие которой могло влиять на результат. Были исследованы 93 образца экссудата, полученных от детей, страдавших хроническим (продолжительностью более 3 мес) ЭСО. Средний возраст пациентов 42 мес. Культуральное исследование проводили посредством посева образцов на шоколадный агар. Результаты Полученные результаты представлены в таблице. 53 (57%) образца экссудата были негативны по Н. influenzae как по данным культурального исследования, так и по результатам ПЦР-ОТ. 11 (11,8%) образцов, напротив, были позитивны по результатам обоих методов исследования. И наконец, 29 (31,2%) образцов экссудата при отрицательных результатах культурального исследования были позитивны по данным ПЦР-ОТ. Таким образом, применение ПЦР-ОТ повысило выявляемость Н. influenzae на 264% по сравнению с культуральным методом. Важно, что практически во всех ДНК-позитивных образцах экссудата была также обнаружена тРНК, следовательно, для адекватной диагностики достаточно тестирования только на наличие бактериальной ДНК, поскольку оно также свидетельствует о присутствии в экссудате жизнеспосИсточник: Нурмухаметова Е. Русский медицинский журнал. 1998. №20. С.1350