1 2 3 4 5 6 7
далее элиминации ЛПНП из кровотока. Подобного рода опыты были проведены нами также с иммунным комплексом ЛП-АТ, сформированным in vivo В этих опытах кроликов предварительно иммунизировали апоВ человека, а затем после развития иммунного ответа им внутривенно вводили меченые апоВ-содержащие ЛП (1 мг на животное) и оценивали скорость их элиминации из кровотока. Оказалось, что их удаление из кровотока было еще более быстрым (практически мгновенным), чем при введении иммунного комплекса, приготовленного in vitio. Возможно, столь быстрое выведение из крови иммунного комплекса ЛП-АТ, образованного in vivo, связано с тем, что он формировался в избытке AT. Для выяснения механизмов, которые приводят к ускорению элиминации иммунных комплексов ЛП-АТ из кровотока, были проведены опыты скультурой легочных фибробластов человека и перитонеальных макрофагов мыши. В этих опытах оба типа клеток инкубировали in vitro или со свободными мечеными ЛПНП человека либо с иммунным комплексом ЛПНП-AT, содержащим меченые ЛПНП. AT против апоВ, вошедшие в состав иммунного комплекса, затормозили поглощение ЛПНП фибробластами, но увеличили захват ЛП макрофагами. Поглощение иммунных комплексов ЛП-АТ макрофагами может приводить к накоплению в этих клетках холестерина и к их трансформации в пенистые клетки. Перитонеальные макрофаги мыши инкубировали с иммунным комплексом ЛПНП-АТ (ЛПНП человека + кроличьи AT к человеческому апоВ; концентрация ЛПНП в составе иммунного комплекса в среднем 50 мкг белка в 1 мл; отношение антиген—AT 4:1). Уже через 3 сут инкубации после окраски на липиды отмечалось присутствие в цитоплазме клеток крупных и мелких липидных вакуолей, сливающихся между собой. При инкубации макрофагов в течение указанного времени со свободными ЛПНП или с комплексом ЛПНП-РаО-фрагмент антиапоВ IgG в цитоплазме клеток наблюдалось образование лишь одиночных липидных вакуолей. При электронной микроскопии в цитоплазме макрофагов, инкубированных с иммунным комплексом ЛПНП-АТ, приготовленным in vitro, наблюдалось образование большого числа липидных вакуолей. В отдельных клетках процесс формирования пенистых клеток имел столь интенсивный характер, что, кроме крупных липидных вакуолей, в цитоплазме наблюдались скопления большого количества остаточных телец (продукты неполного катаболизма ЛП в лизосомах), обрывков различных мембран, остатки клеточных органелл и образование кристаллов моногидрата холестерина. Отдельные клетки были полностью заполнены крупными и мелкими вакуолями и находились в состоянии разрушения. Содержание эстерифицированного холестерина, определенное через использование газожидкостной хроматографии в макрофагах, инкубированных с иммунным комплексом ЛПНП-АТ, было примерно в 60 раз выше такового в клетках, инкубированных со свободными ЛПНП или с безлипопротеиновой сывороткой, и достигало уровня, типичного для пенистых клеток — 60,8 мкг эстерифицированного холестерина на 1 мг белка клеток (табл. 3). Концентрация свободного холестерина в этих клетках возрастала в значительно меньшей сте далее ...